Chương trình vũ khí sinh học của Hoa Kỳ được khởi xướng bởi Tổng thống Franklin Roosevelt và Bộ trưởng Chiến tranh Hoa Kỳ vào tháng 10 năm 1941.[18] Một cơ sở sản xuất được xây dựng tại Terre Haute, Indiana, nhưng thử nghiệm với tác nhân lành tính cho thấy cơ sở bị nhiễm bẩn nên không có hoạt động sản xuất nào diễn ra trong Chiến tranh thế giới thứ hai.[19]

Chính phủ và quân đội Hoa Kỳ được biết đến với việc sử dụng dân thường để kiểm tra tác động của vũ khí sinh học. Năm 1950, Hải quân Hoa Kỳ đã tiến hành một thí nghiệm bí mật đối với dân thường của Khu vực Vịnh San Francisco trong Chiến dịch Sea-Spray, trong đó hơn 800.000 dân thường đã vô tình bị phun mầm bệnh. Điều này dẫn đến ít nhất một cái chết và hệ sinh thái đã bị thay đổi không thể đảo ngược.[20]

Năm 1951, quân đội Hoa Kỳ cũng đã thả các bào tử nấm tại Trung tâm Cung cấp Hải quân Norfolk cho các công nhân người Mỹ gốc Phi để xem họ có dễ bị nhiễm mầm bệnh hơn người da trắng hay không.[21] Năm 1966, chính phủ Hoa Kỳ đã thả Bacillus globigii lên Tàu điện ngầm New York để nghiên cứu cách dân thường bị sử dụng để phát tán mầm bệnh. Người ta tuyên bố rằng nhiều người trong số những người bị phơi nhiễm sau đó đã được phát hiện có các tình trạng y tế lâu dài mà quân đội đã phủ nhận nguyên nhân.[21]

Chính phủ Hoa Kỳ tiếp tục các thí nghiệm tương tự đối với dân thường ở các thành phố khác trên khắp liên bang cho đến đầu những năm 1970.

Cơ sở Dugway Proving Ground ở Utah, khai trương năm 1942, cho đến ngày nay là nơi thử nghiệm và lưu trữ vũ khí sinh học. Năm 1968, cơ sở này đã đầu độc 6.000 con cừu bằng chất độc thần kinh VX. Cơ sở rộng 800.000 mẫu Anh được cho là đã vũ khí hóa bọ chét, muỗi, cũng như tiến hành các thí nghiệm trên cả động vật và người.[22]

Một cơ sở sản xuất tiên tiến hơn được xây dựng ở Pine Bluff, Arkansas, nơi bắt đầu sản xuất các tác nhân sinh học vào năm 1954. Fort Detrick, Maryland, sau này trở thành cơ sở sản xuất cũng như một địa điểm nghiên cứu để Hoa Kỳ phát triển vũ khí sinh học chống nhân sự và chống mùa màng.[23] Một số hệ thống triển khai đã được phát triển bao gồm bình xịt trên không, bình xịt aerosol, lựu đạn, đầu đạn tên lửa và bom chùm.

Vào giữa năm 1969, Vương quốc Anh và Khối Warsaw đã đưa ra các đề xuất riêng rẽ với Liên Hợp Quốc về cấm vũ khí sinh học, nó đã dẫn đến một hiệp ước vào năm 1972. Hoa Kỳ đã hủy bỏ chương trình vũ khí sinh học tấn công của mình theo sắc lệnh hành pháp vào tháng 11 năm 1969 (đối với vi sinh vật) và tháng 2 năm 1970 (đối với chất độc) và ra lệnh tiêu hủy tất cả vũ khí sinh học tấn công, diễn ra từ tháng 5 năm 1971 đến tháng 2 năm 1973. Hoa Kỳ phê chuẩn Nghị định thư Genève ngày 22 tháng 1 năm 1975. Hoa Kỳ phê chuẩn Công ước Vũ khí sinh học (BWC) đã ký có hiệu lực vào tháng 3 năm 1975.[Kissinger 1969]

Viện nghiên cứu bệnh truyền nhiễm của quân đội Hoa Kỳ, đặt tại Fort Detrick, sản xuất một lượng nhỏ tác nhân sinh học, để sử dụng trong nghiên cứu phòng thủ vũ khí sinh học. Theo chính phủ Hoa Kỳ, nghiên cứu này được thực hiện đầy đủ theo BWC.

Vào tháng 9 năm 2001, ngay sau vụ tấn công ngày 11 tháng 9 vào Hoa Kỳ, đã có một loạt vụ tấn công bằng bệnh than nhằm vào các văn phòng truyền thông Hoa Kỳ và Thượng viện Hoa Kỳ khiến 5 người thiệt mạng.[24][25] Bệnh than được sử dụng trong các cuộc tấn công là chủng Ames, lần đầu tiên được nghiên cứu tại Fort Detrick và sau đó được phân phối cho các phòng thí nghiệm khác trên khắp thế giới.